红糖发酵枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌培养基的配制方法？

枯草芽孢杆菌肌苷发酵工艺流程

首先进入了配料间，在配料间有许多设备，刚一进门右边是配料罐，就是把原物料按照比列配好装进料车，进行搅拌混匀。配料罐下边就有一个高压泵。该绷得功能就是把配好的物料通过管道压入储料罐，在配料罐旁边就有一个卧式的储水罐，该罐主要是和配好的干物料进行混合形成料浆，，在储料罐前面有一个维持罐，该罐主要是将干物料和水混合后灭菌。在储料罐下方也有一个高压泵，将干物料压入维持罐。在灭菌时过程要求比较严格，整个管路，包括通往发酵罐的管路，还有发酵罐都需要蒸汽灭菌，至于灭菌的时间随情况而定，一般至少需要一个小时。由于原料比较贵，而且投入量比较多，所以一般灭菌时间较实验室长。
从配料间出来看到一排很歪曲的管路，这就是喷淋降温管，因为灭过菌的培养基温度很高，在120度左右，将他送入发酵罐后降温过程比较慢，所以再送入发酵罐前进行降温。该降温管路设计巧妙，通过用冷水喷淋，可以在很快时间内将培养基降至80—90度。
在配料间外面还有一个空气过滤机，它通过好几重过滤，把空气变成无菌空气，并将之通过管路送入发酵罐。
发酵罐是几个比较大的罐子，高达十几米，容积达到上百吨。在我们参观过程中，发现他们的发酵罐和我们在实验室看到大体相同，只是他们的取样口在中间，而且，他们的放料口和排污口在同一管道，是通过阀门控制的。整个发酵罐通过电子检测，温度，压力，pH值等项。
在发酵罐旁边有种子罐，主要是培养种子菌，在种子长到对数期时通过管道被输送到发酵罐中。发酵罐中发酵周期一般是6到7天。
发酵后的发酵液通过管道输送到过滤车间中，该车间的设备是无机陶瓷膜过滤器，经过过滤后滤液中含有高浓度的肌苷。下一步就是把滤液进一步浓缩。所以我们又参观了浓缩车间。该车间的设备是一个三效浓缩机，是把滤液经过三重过滤，将水分通过真空抽掉，使之浓度升高。三效浓缩机是由三个罐子组成。
浓缩车间产出的物料经管道输送到精制车间，主要工艺是经过降温，离心，洗涤等。降温过程是在短时间内将产品降到5度以下，经过离心使其结晶。经洗涤后在离心，最后将产品取出，这时的产品就是初肌苷。
初肌苷在另一车间被进一步精制，将之送入脱色罐中进行脱色，在罐中主要是通过活性炭吸附产品表面的色素和杂质。经过一段时间的脱色，在通过脱色罐下方的空气压滤机将活性炭滤去。
经过这些工艺后产出的产品就是肌苷了，经过检测，合格的可以出售或者用于加工其他药品。

枯草芽孢杆菌用做发酵剂主要使用范围是哪些呢？

 使用范围：畜禽粪便、作物秸杆、饼粕、糠壳、污泥、城市有机废弃物、农产品加工废弃料（蔗糖泥、果渣、茶渣、蘑菇渣、酒糟、糠醛渣等）。 

枯草芽孢杆菌培养基的配制方法？

枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。 2. 收集细胞 各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取0.5 mL 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。

枯草芽孢杆菌，用什么样的菌数好？

有很多的企业，他们的生产能力不行，做出来的产品菌数比较低，比如只有50亿/克，原则上他们是竞争不过200亿的，那么他们就提出了一种说法，我们的枯草芽孢杆菌是第6代的或第10代的，含量虽然只有50亿，加红糖活化后，2个小时内可以繁殖出10万亿/克，活性很好。一般的消费者都不是很专业的，没有检测设备，也不懂检测方法，因此就给企业钻了这个漏洞，反正客户不懂，我说多少就多少。在此做一下说明，枯草芽孢杆菌的繁殖能力一般是2个小时左右繁殖一代，但是繁殖速度并不是倍数增长的，比如说200亿/克的，2个小时后是400亿/克，4个小时后是800亿/克。理论上是这样，但实际上不是这样的。因此2个小时达到10万倍的说法不正确的，另外，一克纯细菌的重量在1万亿左右，所有生产出来的枯草芽孢杆菌都有载体和培养基的， 1克重量的产品除了细菌还有载体，所以绝对不可能达到1万亿/克的，10万亿的说法，估计是整袋产品的总含量，而并不是1克的含量，比较容易误导人。

请教：枯草芽孢杆菌在淡水养鱼塘里的应用

插点题外话：如何对症处理蓝藻 在养殖中后期蓝藻过多是养殖塘中常见的一种情况，要根据蓝藻的不同阶段对症施治。 蓝藻的生活特性如下： ①蓝藻适宜的生活环境：高温天气、水体中有机质丰富、水体一般富营养化； ②蓝藻具有一般藻类的生长特点：其生命周期大概为30天，整个生命周期可分三个阶段：生长期、高峰期、老化期； ③有过多蓝藻的池塘呈现的颜色一般为翠绿色（由蓝藻大类中的铜绿微囊藻和不定微囊藻产生）或者是蓝绿色（由蓝藻大类中的鱼腥藻和颤藻产生），产生这两种水色的同时，一般会在池塘四周（尤其是下风口）浮有一层翠绿色的膜，阳光下其颜色呈绿色油漆状。 不同阶段的蓝藻处理的方法也不同： （1）生长期（蓝藻生命周期的前10天）：在蓝藻的生长初期，一般不容易观察出这个时期的生成，但是池塘的一些状况可以看出这个阶段的生成，比如天气高温、水有些发浑、水体中有机质丰富等，如果池塘具备了这些特征，那么蓝藻就容易生长，为杜绝这个阶段的生成，需注意维护水质：①减少放养量，规格上求大，从而减少饲料的投喂，以此减少水体有机质的积累，这是最根本的方法；②在养殖前期就开始坚持使用微生物制剂，将逐渐产生的有机质分解掉。 （2）高峰期（蓝藻生命周期的中间10天）：在这个时期中，藻类的数量会急剧升多，蓝藻大量出现，在有风或者开增氧机的情况下，水面会呈鲜亮的绿色（这是和老化水的一个区分点），下风口会有油漆状膜出现，水体透明度极低，处在这个时期的藻类生命力最为旺盛。可使用杀藻的专用制剂（苔藻净）或者一些氧化性的消毒剂（如二氧化氯）；在杀藻后的3～5天内注意巡塘，防止死亡的藻类在池底厌氧发酵而产生有害物质，此时可使用底改加芽孢杆菌制剂重新调理好水质。 （3）老化期（蓝藻生命周期的后10天）：这个时期水体的特征如下：水色有些发黑，同时水的颜色不再显现鲜亮的绿色，在有风或开增氧机的情况下，水体表面有些发暗，这是与蓝藻高峰期的最大区别，同时下风口处也有绿色油漆状油膜。此时蓝藻整体处于新老交替时期，总体活性较弱，可以使用具有净化水质效果的微生物制剂，建议用芽孢杆菌制剂，3天用两次，一般经过5～6天的时间，藻类会有死亡。

寻采用不同比例的淀粉的发酵液培养枯草芽孢杆菌进行发酵最佳工艺

实验菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)1．210；D53、D56：从活性污泥中分离得到。 培养基的配制 斜面培养基(营养琼脂)：蛋白胨1％，NaC1 0．5 D／0，牛肉膏0．3％，琼脂2％。

液体营养肉汤培养基：蛋白胨1％，NaC1 0．5％，牛肉膏0．5％。 淀粉酶试验培养基：在营养琼脂培养基中加2％的可溶性淀粉即成。 以上3种培养基的pH值均为7．2～7．4，分装后121℃灭菌20min。 产淀粉酶发酵培养基：玉米粉8％，蛋白胨0．5％，豆饼粉4％ ，K~HPO 5％ ，(NH4)2SO 0．4％ ，pH值自然，0．05MPa灭菌20min。 试剂与仪器设备 试剂：革兰氏染色染色试剂，Taq E，dNTPs(4种脱氧核苷三磷酸)，6x loading Bufer，50x TAE(用时稀释成lx TAE)，引物片断：27f5’一agagttgatcctggctcag一3’，1492r5’．ggttaccRgttacgacf一3’，引物浓度：1OD稀释至10001~L，琼脂糖，Goldview(用于替代EB的染料)，D2000 DNA Maker。 仪器与设备：DYY．III33B型电泳槽，MJResearch．PTC．200PCR仪，灭菌锅，离心机，37％ 恒温培养箱，水浴锅。 取样、富集培养 取样时将水和污泥一起取来，静置使污泥沉降，待污泥沉降后直接用灭菌过的移液管吸取1．0mL上清液，注入无菌水中，稀释适宜的倍数，以无菌操作注入固体培养基平板中。倒置放入生化培养箱中，37％富集培养24h-36h。 菌种的鉴定 形态学观察：取少量菌种制成玻片，通过革兰氏染色，在显微镜下观察菌落形态特征。生理生化鉴定：根据《常见细菌系统鉴定手册》进行鉴定。16SrRNA同源性比较：取菌株D53、D56的48h的平板培养物为模板，配制50 L地体系，进行PCR扩增。 PCR反应体系：ddH2O 381~L，10×Taq E Bufer 5 L，dNTPs(2．5mmol／L)41~L，引物1(27D1 L，引物2(1492r)1IxL，离心混匀，分装。再分别加入模DNA O．5 L，TaqE(5U／~L)0．51xL，离心混匀。 制胶：l％琼脂糖(1g琼脂加100mL 1×TAE(电泳缓冲液))，再在lOOmL琼脂糖中加1 L～2 LGoldView。 电泳缓冲液：l×TAE倒入电泳槽中直至没过胶面并高出3～5mm。 点样：6xLoadingBufer(点样缓冲液)llxL，DNA51xL。 电泳：点好样后，设定电泳条件：电压150V，30min。 PCR反应条件：94℃、5min；(94℃、1min；52℃、1min72℃、2min)25个循环；72℃、10min，4℃ 保温。 PCR产物经脱盐纯化后，由北京华大中生科技发展有限公司进行测序，要求双向测通，将拼接后的测序 结果输入、 州．NCBI．nlm．nih．gov，利用BLAST软件，将测定得到的基因序列与Genbank数据库的序列作比对分析，进行同源性比较。 分离菌株的产淀粉酶透明圈试验 按参考文献[8]方法分别将D53、D56斜面菌株接入养肉汤液体培养基的试管中，37％培养24h后，分别划 线接种于淀粉酶试验培养基中，作2个平行。通过稀释菌液以使在平板上出现单菌落。将接好的平板置于37~C恒温培养箱中培养24h，取出后分别滴加现配制的路哥氏碘液，全部漫过平板，放置片刻，即可对其透明圈进行观察和测量。 菌株产淀粉酶粗酶活的测定 酶活力定义：lmL酶液于60％、pH6．0的条件下，在1h内催化2％可溶性淀粉成为糊精的克数为1个酶活 力单位。 将保存在斜面的菌株，分别接入发酵培养基中，37％、200r／min培养44h后，分别取发酵液测定酶活。

在水产养殖上什么菌都可以用红糖发酵吗

这个不一定，主要看用的菌的碳源，不过一般水产上使用的都可以用红糖作碳源，一些异养菌可以使用二氧化碳作为碳源就不需要红糖了

酵素浴的发酵方法

酵素浴要通过微生物发酵产生热量才会起作用的，最常用的发酵剂就是枯草芽孢杆菌，使用枯草芽孢杆菌的标准就是含菌量的高低，原则上菌数越高，发酵时间越快。市面上比较常见的含菌数是200亿/克，选择的时候注意问清楚杂菌的含量，发酵方法：按物料使用量的千分之一添加枯草芽孢杆菌，如1吨物料加1公斤枯草芽孢杆菌，把枯草芽孢杆菌和红糖和水按1：1：20的比例浸泡8-24小时，称之为活化，活化好后，把这些水与物料搅拌均匀即可，（注意：如果20倍的水不够搅拌，可以加入足够的水到活化好的水里再搅拌。）一般情况下，6-24小时后会逐渐升温，最高可达70度左右。温度只要控制在50-70度左右即可让客人进行酵素浴。此温度一般持续几天，当温度下降时，可往里面加入适当的红糖搅拌均匀即可。枯草芽孢杆菌得到养份补充，会继续作用，但不宜长期添加红糖，就要把物料重新换掉发酵，否则使用时间过程。会产生杂菌，杂菌太多就会影响到酵素浴的质量。